人白介素27(IL-27)ELISA kit_供应产品_上海继锦化学科技有限公司

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产品详情

人白介素27(IL-27)ELISA kit

  • 产品/服务:人白介素27(IL-27)ELISA kit
  • 单 价:面议 
  • 更新日期:2017-11-07
  • 有效期至:长期有效
  • 浏览次数:1323
产品简介

产品规格:96T试剂盒组成及试剂配制1. 酶联板:一块(96孔)2. 标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好...

产品详细介绍

产品规格:96T

试剂盒组成及试剂配制

1.        酶联板:一块(96孔)
2.        标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为1,600 pg/ml,将其稀释为400 pg/ml后,再做系列倍比稀释注:不要直接在板中进行倍比稀释,分别稀释成400 pg/ml200 pg/ml,100 pg/ml,50 pg/ml25 pg/ml12.5 pg/ml,6。25 pg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml,临用前15分钟内配制。如配制200 pg/ml标准品:取0.5ml 不要少于0.5ml 400 pg/ml的上述标准品加入含有0。5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3.        样品稀释液1×20ml
4.        检测稀释液A1×10ml。
5.        检测稀释液B1×10ml。
6.        检测溶液A1×120μl1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μl/孔),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A990μl检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
7.        检测溶液B1×120μl/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。
8。        底物溶液1×10ml/瓶。
9.        浓洗涤液1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10.    终止液1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
11。    覆膜5
12.    使用说明书:1
 
自备物品
1.   酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热)
2.   微量加液器及吸头,EP
3.   蒸馏水或去离子水,全新滤纸
 
标本的采集及保存
1。        血清:全血标本请于室温放置2小时或4过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20-80保存,但应避免反复冻融。
2。        血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20-80保存,但应避免反复冻融。
3.        其它生物标本:请1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20-80保存,但应避免反复冻融。
4。        样本处理:血清或血浆标本推荐稀释5,000倍。
注:以上标本置4℃保存应小于1周,-20℃或-80℃均应密封保存,-20℃不应超过1个月,-80℃不应超过2个月;标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
 
操作步骤
实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
1.        加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2。        弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37反应60分钟。
3。        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
4.        每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37反应60分钟。
5。        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
6。        依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37避光显色30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7。       依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。
 
1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
2.  加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响最后的酶标仪读数。
5.  试剂配制:Detection ADetection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请精确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数。
 
洗板方法
1。 手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟,根据需要,重复此过程数次。
2. 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
 
计算
 以标准物的浓度为纵坐标(对数坐标),OD值为横坐标(对数坐标),在对数坐标纸上绘出标准曲线。推荐使用专业制作曲线软件进行分析,如curve expert 1.3,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

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